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细胞培养实验室的整体规划

2015-07-30

组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。一.细胞培养实验室包括:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。

  1.无菌操作区

  (1)无菌操作室应划为三部分:更衣室、缓冲间、无菌操作间无菌操作间专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当,且其顶部不宜过高(不超过2.5m)以保证紫外线的有效灭菌效果;无菌操作间的空气消毒:紫外线灯产生臭氧,并且室内温度及湿度均较高,不利于工作人员健康。空气过滤的恒温恒湿装置zui好。

  (2)净化工作台:操作简单,安装方便,占用空间小且净化效果很好。一般细胞培养室使用的净化工作台主要有两种:a)侧流式或称垂直式 b)外流式或称水平层流式。

  2.孵育区本区对无菌的要求虽不比无菌区严格,但仍需清洁无尘,因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。

  3.制备区在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。

  4.储藏区主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等,此环境也需要清洁无尘。

  5.清洗和消毒灭菌区清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开,主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。

  (二)细胞培养实验室的设备

  a)显微镜:倒置显微镜——是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一,便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。若有条件,尚可配置带有照相系统的高质量相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,以便随时观察、记录、摄影细胞生长情况。

  b)CO2培养箱——目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2(常用浓度为5%),易于使培养液的pH保持稳定,适用于开放或半开放培养。

  c)水纯化装置:细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。目前国内使用较多的是自动双重纯水蒸馏器(石英管加热),使用方便,安全、蒸馏速度快(1600ml/h)。

  d)冰箱:细胞培养室必须配备

  e)细胞冷冻储存器:储存器常用的是液氮罐。

  f)离心机:一般可常规配置4000rpm的国产台式离心机,例如细胞沉降,使用80~100g的离心机即可,离心力过大有时可能引起细胞的损伤。

  g)天平:常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。

  h)滤器:多采用滤过消毒以除去细菌。

  i)培养用器皿耗材:培养瓶、培养皿:、多孔培养板、贮液瓶、吸管、加样器等。

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